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    凱氏定氮儀測定白葡萄球菌粉中的蛋白質含量

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    內容節點
    概述
    實驗/設備條件
    樣品提取
    實驗/操作方法
    實驗結果/結論
    儀器/耗材清單

    1 前言

    白葡萄球菌粉是經現代生物工程技術深層培養、精制而成的。為黃褐色粉末;有似干酵母臭,無味。由非致病性表皮葡萄球菌(白色葡萄球菌)液體培養而得的滅活干燥菌體制成。本品及相關制劑作為止 咳藥,適用于慢性支氣管炎等呼吸道疾病引起的咳嗽、痰多。本實驗參照《中國藥典 2020 年版 第四部 0731 蛋白質含量測定 第一法 凱氏定氮法》對白葡萄球菌粉中的蛋白質含量進行測定。

    2 儀器與試劑

    2.1 儀器

    K1160 全自動凱氏定氮儀,分析天平 。

    2.2 試劑

    20g/L 硼酸溶液,溴甲酚綠-甲基紅混合指示劑,400g/L 氫氧化鈉,0.02mol/L 硫酸或鹽酸標準滴定液。

    3 實驗方法

    3.1 樣品制備

    非蛋白氮供試品溶液的制備:精密量取供試品適量(2020 版藥典中規定如供試品為凍干制劑或固體粉末時,應復溶后量取,且蛋白質含量不高于 0.2g。由于本樣品復溶困難,即稱取 0.3~0.4g 樣品。),置 20mL 容量瓶中,加水 10mL,10%鎢酸鈉溶液 2mL,0.33moL/L 硫酸溶液 2mL,加水至刻度,搖勻,靜置 30 分鐘,過濾,棄去初濾液(約3~5mL),取續濾液作為非蛋白氮供試溶液。

    3.2 取樣

    總氮供試品稱取 0.05g(2020 版藥典中規定如供試品為凍干制劑或固體粉末時,應用 0.9%氯化鈉溶液定量稀釋成每 1mL 中含氮量約 1mg 的溶液,然后量取 1mL 進行測定。由于本樣品復溶困難,即稱取 0.05g 樣品。),非蛋白氮供試品量取 2mL 非蛋白氮溶液加入消化管中,各加入 3g 硫酸鉀與 0.2 硫酸銅水,再沿瓶壁滴加硫酸 10ml。

    3.3 消解

    設定消解參數

    表 1 消解參數設置

    image.png

    3.4 測試

    定氮儀參數設置如下表。

    表 2 定氮儀參數設置

    image.png

    4 結果與討論

    4.1 實驗結果

    表 3 白葡萄球菌粉中的蛋白質含量測試結果

    image.png

    4.2 結論

    測試結果顯示本次測試的白葡萄球菌粉中的蛋白質含量為 29.556%。 

    參考文獻

    [1]國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典[ M ] . 四部. 北京: 中國醫藥科技出版社, 2020: 附錄 0731 蛋白質含量測定 第一法凱氏定氮法

    注意事項

    1)該樣品為粉末樣品,因此依據藥典在樣品制備時應制備成合適濃度的溶液進行測試,如樣品復溶困難可直接稱取相應重量樣品進行測試。

    2)本實驗中蛋白質含量=(總氮含量-非蛋白氮含量)*6.25。

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